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溴化乙啶(Ethidium Bromide EB)是一种DNA结合性荧光色素，其激发波长510nm。发射波长595nm。产生桔红色荧光。

EB不具有膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞，因此用EB单染时，正常细胞不着色，早期凋亡细胞呈微弱桔红光，晚期凋亡细胞桔红色荧光增强。死细胞呈强桔红光。EB常与吖啶橙合用双染进行凋亡检测，与吖啶橙双染时，正常细胞中EB不能透膜着色，而吖啶橙可透过细胞膜，使细胞呈绿色均匀荧光，细胞圆形均匀；而在凋亡细胞中，细胞皱缩、染色质凝聚、固缩或断裂，出芽，凋亡小体形成。染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色颗粒；而坏死细胞被EB染成桔红色，由此荧光颜色和细胞形态可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

1. EB单染
   
   1. 收集细胞，1×Buffer A洗一次，加适量的1×Buffer A重悬，调整细胞浓度约为10⁶/mL；
      
   2. 吸取95μL的细胞悬液和5μL的EB染液，轻轻混匀；
      
   3. 室温避光染色15min后，滴加于载玻片上，加盖玻片；
      
      1. 正常细胞——细胞不被染色；
         
      2. 坏死细胞——细胞具桔红色荧光；
   4. 荧光显微镜，滤光片515nm观察，计数、拍照。
2. 与吖啶橙AO双染
   
   1. 收集细胞，1×Buffer A洗一次，加适量的1×Buffer A重悬，调节细胞浓度约为10⁶/mL；
      
   2. 吸取90μL的细胞悬液，加入EB染液和吖啶橙染液各5μL，轻轻混匀；
      
   3. 滴加于载玻片上，室温避光染色15min后，加盖玻片；
      
   4. 荧光显微镜，滤光片515nm观察，计数、拍照。
      
      1. 正常细胞——细胞均匀染成绿色荧光；
         
      2. 坏死细胞——细胞桔黄色荧光；
         
      3. 凋亡细胞——染色质浓缩，细胞核碎裂，被染成大小不一、致密浓染的黄绿色颗粒或见胞质芽状突起。
   5. 计算细胞凋亡率和死亡率